Antimicrobial Activity of Anacyclus Pyrethrum (In Hindi)

 

1. उद्देश्य

क्लिनिक हालत में प्रमुख समस्याओं के कारण है कि एंटीबायोटिक एजेंट के कई प्रकार के बहु दवा प्रतिरोध। बहु दवा प्रतिरोध के मुख्य कारणों में से एक कारण गलत निदान के लिए कुछ मामलों दुरुपयोग में व्यापक स्पेक्ट्रम एंटीबायोटिक दवाओं के अति प्रयोग के दुरुपयोग है। एंटीबायोटिक्स भी मनुष्य के लिए प्रेषित किया जा सकता है, जो कुछ दवा प्रतिरोध बैक्टीरिया पैदा कर रही है पशुपालन में उपयोग करें। प्रतिरोध की उत्पत्ति के लिए एंटीबायोटिक दवाओं के खिलाफ सहज प्रतिरोध किया है हो सकता है और यह आम तौर पर उनके सेल लिफाफा की संरचना में बदलाव को दर्शाता है करने के लिए कहा है कि कुछ बैक्टीरिया के साथ शुरू किया जा कहा जाता है। प्रतिरोध भी बीआर प्ररूपी एक विशिष्ट वातावरण के भीतर विकास के लिए रूपांतरण से उत्पन्न हो सकती है। एंटीबायोटिक दवाओं के लिए प्रतिरोध जीन की उत्पत्ति हालांकि प्रतिरोध गुणसूत्र में या अलग गुणसूत्र लोकी में म्यूटेशन के विदेशी डीएनए के पुनर्संयोजन द्वारा प्रविष्टि दृश्यों, transposons और संयुग्मी प्लास्मिडों के माध्यम से जुटाए प्रतिरोध जीनों की क्षैतिज अधिग्रहण के द्वारा प्राप्त किया जा सकता है, यह स्पष्ट नहीं कर रहे हैं। वर्तमान में चिंता पैदा कर प्रतिरोधी जीवों की संख्या में रहे हैं। ग्राम पॉजिटिव जीवों मेथिसिलिन प्रतिरोध स्ताफ्य्लोकोच्चुस और coagulase नकारात्मक staphylococci, glycopeptides मध्यवर्ती संवेदनशीलता s.aureus, vancomycin प्रतिरोधी Enterococcus प्रजातियों और पेनिसिलिन प्रतिरोधी स्ट्रेप्टोकोकस निमोनिया शामिल हैं। ग्राम नकारात्मक जीवों के बीच चिंताओं बहुऔषध प्रतिरोधी Pseudomonas aeruginosa, stenotrophomonas maltophilia और Acinetobacter baumanii और विस्तारित स्पेक्ट्रम β-lactamases साथ Enterobacteriaceae के सदस्यों में शामिल हैं। माइकोबैक्टीरियम क्षयरोग और एम avium जटिल दुनिया भर में प्रमुख स्वास्थ्य खतरा है। [31, 32]

ध्यान में रखते हुए दवा प्रतिरोध दुनिया की स्थिति में प्राकृतिक संसाधनों की ओर देख रहा है पर काबू पाने के लिए। यहां वर्तमान अध्ययन के रूप में रोगाणुरोधी संयंत्र Anacyclus गुलदाउदी की संभावित क्षमता की समीक्षा करने के लिए करना है। Anacyclus गुलदाउदी विशेष रूप से अपनी कीटनाशी की क्षमता के लिए अपने विभिन्न गुणों के लिए कई वर्षों के लिए इस्तेमाल किया गया है। वर्तमान कार्य Anacyclus गुलदाउदी के विभिन्न हिस्से से अलग निकालने की तैयारी के लिए बाहर ले गए। इस निकालने के विभिन्न ग्राम के खिलाफ जीवाणुरोधी प्रभावकारिता की इन विट्रो विश्लेषण के लिए इस्तेमाल + ve और -ve सूक्ष्मजीवों ग्राम कर दिया गया है। प्राप्त करने के परिणामों का मूल्यांकन किया और निकालने सूक्ष्मजीवों के खिलाफ अधिकतम जीवाणुरोधी प्रभावकारिता दिखाया एमआईसी और अति पिछड़े वर्गों के अध्ययन के लिए लिया गया है। Anacyclus गुलदाउदी की phytochemical मूल्यांकन के लिए जीसी / एमएस बाहर किए गए करने के लिए अधिकतम प्रभावकारिता दिखा निकालें इस्तेमाल किया गया।

2. परिचय

2.1 संयंत्र शख्सियत
गुलदाउदी झाड़ के परिवार में जीनस Anacyclus के अंतर्गत आता है। प्रजातियों Cinerariefolium के फूल लंबे समय से उनके कीटनाशी गुण के लिए व्यावसायिक रूप से शोषण किया गया है। ये गुण शायद उसके जन्मदिन पर फूलों का एक गुलदस्ता जो मिला Dalmatia में एक जर्मन महिला ने 1840 में गलती से खोज रहे थे। एक रात भर जश्न मना करने के बाद, वह एक कोने में फूलों को फेंक दिया। सुबह में फूलों मृत कीट से घिरे थे। कीड़ों की मौत के कीड़ों की कीटनाशी गुण के साथ जुड़े थे। तब से फूल सामूहिक pyrethrins के रूप में जाना जाता है प्राकृतिक कीटनाशकों का एक स्रोत के रूप में अपनी पूर्ण, प्रभावी और सुरक्षित वाणिज्यिक दोहन की स्थापना व्यापक अनुसंधान आया है। [1, 2]

2.2 वर्गीकरण
वानस्पतिक नाम: - Anacyclus गुलदाउदी
वानस्पतिक स्रोतों: - फूल, जड़, एरियल हिस्सा
पर्याय: - Pellitory, akalakari, akarakara, Dalmation
Kingdome: - प्लांटी
प्रभाग: - स्पर्माटोफाइटा
उप-विभाजन: - आवृतबीजी
कक्षा: - Dicotyledons
उप वर्ग: - Metachlamydae
आदेश: - Companulate
परिवार: - झाड़
जीनस: - Anacyclus
प्रजाति: - Pyrethrum

2.3 भौगोलिक स्रोतों
 Anacyclus गुलदाउदी, Pellitory, akarakara विभिन्न नामों के तहत अलग-अलग देशों में जाना जाता है एक व्यापक आधार पर वितरित संयंत्र, Dalmation आदि केन्या दुनिया की खपत का लगभग 70% उत्पादन गुलदाउदी निकालने का प्रमुख उत्पादक है। गुलदाउदी के अन्य बड़े उत्पादकों ऑस्ट्रेलिया में रवांडा, तंजानिया और तस्मानिया हैं। भारत में यह हिमालय, जम्मू एवं कश्मीर, और बंगाल के साथ पाया जाता है। [3,4,5]

2.4 खेती और संग्रह
गुलदाउदी भूमध्य रेखा से दूरी पर निर्भर करता है, 1500 3500 मीटर की दूरी के एक दृष्टिकोण पर उष्णकटिबंधीय क्षेत्र में खेती की जाती है। मिट्टी की आवश्यकताओं को एक विशेष क्षेत्र में बारिश और अन्य मौसमी परिस्थितियों पर निर्भर करते हैं। 800 1300 मिमी के बीच बारिश गिरावट गुलदाउदी की खेती के लिए उपयुक्त मानते हैं। संयंत्र ठंढ करने के लिए बहुत ही संवेदनशील है, वर्षा के दखल धूप अवधि की खेती के लिए शर्त वांछित हैं। यह 25 डिग्री सेल्सियस से 15 डिग्री सेल्सियस के बीच एक तापमान की जरूरत है। बीज को पानी में भिगो कर रहे हैं और उसके बाद बर्खास्त में लिपटे और dampens में और चार या पांच दिन के लिए दफन कर रहे हैं। वे तो सूखी रेत के साथ मिलाया और पत्थरों और बादलों से मुक्त कर दिया गया है, जो अच्छी तरह से सूखा, धूप बीज बिस्तर ध्यान से plawed होने, मुलायम रेतीली मिट्टी में बोया जाता है। खाद और अधिभास्वीय से मिलकर उर्वरक बुवाई से पहले बिस्तर में काम किया है; उर्वरक के अत्यधिक उपयोग भी तेजी से वृद्धि का कारण बनता है और बचा है। बीज की एक पिंट बिस्तर से 150 वर्ग गज की दूरी के लिए प्रयोग किया जाता है; इस महान के रूप में एक क्षेत्र के लिए दस बार पर्याप्त पौध निकलेगा। पृथ्वी या राख के साथ कवर कर रहे हैं बीज बोने के बाद, बेड के साथ हैं और वे ध्यान से पानी पिलाया जाता सूखे के समय में स्क्रीन के साथ छायांकित हैं। वे दो से तीन इंच उच्च रहे हैं जब अंकुर, के बारे में बारह दिनों में दिखाई देता है, उर्वरक जोड़ा जाता है। 4-5 महीनों के बाद पौध के बारे में चार इंच की ऊंचाई तक पहुंचने और रोपाई के लिए तैयार हैं। यह मजबूती से ठंड के मौसम से पहले खुद को स्थापित करने के लिए जड़ों की अनुमति के लिए काफी पहले से किया जाना चाहिए, अन्यथा वे सर्दियों मार डालेगा। क्षेत्र सावधानी से, खाद समाप्त और समतल जोता जाता है। पौध पंक्तियों के बीच 7 से 12 इंच के अंतराल पर पंक्तियों में लगाए हैं। पंक्तियों उठाया या जड़ों के आसपास पानी इकट्ठा करने से रोकने के लिए चोटी वाला हैं। पौधों को भी गहराई से सेट कर रहे हैं, तो कुछ फूलों का उत्पादन किया जाता है। वे के बारे में 70% खुले हैं जब नियत निश्चित इलाके और फूल में 14 से 18 दिनों उठाया जाता है के लिए कटाई अवधि फैली हुई है। फूल उठा हाथों द्वारा किया गया था। सुखाने आम तौर पर के बारे में 5 से 7 दिन की आवश्यकता है और दिन में, फूल सिर और जड़ पुआल मैट फैल रहा है और रात में घर के अंदर उन्हें रखने के द्वारा पूरा किया है। वे आसानी से उंगलियों के बीच टूटने लगे किया जा सकता है, ताकि फूल और जड़ अच्छी तरह से सूख रहे हैं, वे पुआल बैग और दुकान में पैक कर रहे हैं। प्रति हेक्टेयर दवा की औसत उपज 300 से 400 किलोग्राम है। [5, 6]

2.5 स्थूल किरदार
यह कैमोमाइल जैसी एक बारहमासी, मुंह के बल गिरा हुआ जड़ी बूटी है। सीधा बढ़ने से पहले, उनकी लंबाई के भाग के लिए जमीन पर झूठ उपजा है। हर एक बड़े टर्मिनल फूल भालू, नीचे बैंगनी के साथ tinged पीला जा रहा है डिस्क और किरण का सफेद,। पत्तियों गहरा कटौती क्षेत्रों के साथ हरे रंग पीला, चिकनी, वैकल्पिक, और सुफ़ने हैं। फल obovate achene। जड़ बहुत थोड़ा मुड़ और लंबा और पतला, लगभग बेलनाकार और अक्सर भूरे बालों का एक गुच्छा के साथ ताज पहनाया है। इसे बाहर से चमकदार काले धब्बों के साथ, भूरा और झुर्रियों है। राल नलिकाओं के 1-2 हलकों, बारीकी से राल नलिकाओं की 1-3 पंक्तियों होते हैं जिसमें झरझरा लकड़ी विकीर्ण पीले करने के लिए पालन करने के साथ फ्रैक्चर कम है, छाल; अलग गंध; मिठा, तीखा, बहुत तीखा, झुनझुनी, sialagogue प्रभाव स्वाद।

2.6 सूक्ष्म किरदार

2.6.1 रूट - परिपक्व जड़ स्क्लेरेनकाइमा के रूप में विकसित करने के लिए कई सारणीबद्ध कोशिकाओं से मिलकर काग पता चलता है; कुछ भीतरी काग कोशिकाओं कैल्शियम oxalate की थाली क्रिस्टल होते हैं; tangentially isodiametric या से मिलकर माध्यमिक कोर्टेक्स, लम्बी, पतली दीवारों, पेरेंकाईमेटस कोशिकाओं को भी माध्यमिक कोर्टेक्स में बिखरे हुए पाया कुछ sclerenchymatous कोशिकाओं; सामान्य तत्वों से मिलकर माध्यमिक फ्लोएम, बहुत व्यापक जाइलम वाहिकाओं, ट्रेकीड और जाइलम पैरेन्काइमा से मिलकर केंबियम 2-5 बहुस्तरीय, माध्यमिक जाइलम; , संकीर्ण लुमेन होने लंबाई में 231 μ, दिमाग़ी किरणों कई सीधे चल रहा है - वाहिकाओं और अधिक या कम समूहों में जाइलम भर में वितरित, खड़ा है, और अधिक और व्यापक वाहिकाओं, चौड़ाई में 1.37-28.8 μ, जाइलम फाइबर मोटी दीवारों, peripery की दिशा में 53.2 पाया द्वि त्रि और multiseriate, uniseriate किरणों बहुत दुर्लभ है, प्राथमिक जाइलम से शुरू करने और माध्यमिक कोर्टेक्स तक पहुँचने के लिए; मोटी दीवारों रे कोशिकाओं, त्रिज्यात, inulin लम्बी।

                           चित्रा 2: रूट के पार अनुभाग के सूक्ष्मदर्शीफ़ोटोग्राफ़: ए काग, पत्थर कोशिकाओं के बी-रिंग,                                प्राथमिक कॉर्टेक्स के सी-पैरेन्काइमा, डी-Cambian, ई-दिमाग़ी रे, एफ जाइलम

माध्यमिक कॉर्टेक्स, माध्यमिक फ्लोएम और दिमाग़ी किरणों की कोशिकाओं में मौजूद; माध्यमिक कॉर्टेक्स, माध्यमिक फ्लोएम और दिमाग़ी किरणों में बिखरे हुए पाया ओलियो-राल schizogenous ग्रंथियों; माध्यमिक कॉर्टेक्स, माध्यमिक फ्लोएम, माध्यमिक जाइलम और दिमाग़ी रे कोशिकाओं में थाली प्रपत्र वर्तमान में कैल्शियम oxalate क्रिस्टल। [7], [8]

2.6.2 पाउडर - ऐश रंग का; scalariform उमड़ना, कैल्शियम oxalate और स्क्लेरेनकाइमा के टुकड़े की थाली क्रिस्टल होने वाहिकाओं पता चलता है; यह भी inulin के लिए सकारात्मक परीक्षण देता है।

2.7 ANACYCLUS गुलदाउदी का phytochemical घटक

2.7.1 फूल: - Anacyclus गुलदाउदी फूल के सिद्धांतों को आंशिक रूप से खुला है या बंद फूलों की पुष्प भागों के oleoresin स्राव में स्थित हैं। मैं pyrethrin और pyrethrin द्वितीय मुख्य सक्रिय घटक हैं, यद्यपि यह भी कहा कि मैं cinerin बुलाया अन्य सक्रिय यौगिकों, cinerin द्वितीय, jasmoline शामिल मैं और Jasmoline द्वितीय। इन सभी घटक रासायनिक एस्टर हैं। [5]

2.7.2 रूट: - रूट एल्काइल amides, सक्रिय है, जो संविधान के pyrethrin शामिल हैं। Anacyclus गुलदाउदी की जड़ों की अल्काइल एमाइड अंश निम्न isobutylamides और tyramine amides से बना है। sesamin - जड़ Anacyclin, Pellitorine enetriyne शराब (pyrethrins), hydrocarolin, inulin (50%), वाष्पशील तेल और (+) के निशान होते हैं। उन्होंने यह भी एन (2-पी-हाइड्रोक्सी phenylethyl) Deca, dodeca, और tetradeca- ट्रांस-2, isobutylamides करने के लिए इसी Tyra मेरा amides की एक नई श्रृंखला में होते हैं। [9]

2.7.3 एरियल हिस्सा: - Anacyclus pyrethum एरियल भागों सक्रिय घटक Anacyclin, एन methylanacyclin, Nmethyl- एन (2 मिथाइल propyl) 2, 6-diynamide बहुत कम pyrethrin मैं की मात्रा और साथ साथ 8-decadiene 4, है शामिल pyrethrin द्वितीय। Anacylcus जड़ी बूटी ऐसे pellitorine, anacyclin, enetriyne शराब, inulin, hydrocarolin, sesamin और वाष्पशील तेल के निशान के रूप में विभिन्न रासायनिक घटक शामिल [9] दूसरों amongs। Pyrethrin, एक उपक्षार इस जड़ी बूटी में एक सक्रिय घटक माना जाता है। जड़ी बूटी की जड़ों रक्तिमाकर और उत्तेजक गुण में समृद्ध है। जड़ी बूटी के विभिन्न औषधीय लाभ इस लेख में चर्चा कर रहे हैं।

2.7.4 औषधीय उपयोग करता है

गुलदाउदी के पौधे के रूप में आयोजिक कर रहे हैं विभिन्न औषधीय मुख्य इस्तेमाल के लिए प्रयोग किया जाता है:

1. पाउडर जड़ एक अच्छा नास सिर और नाक की पुरानी सर्दी का इलाज करने के लिए और नाक श्लेष्म और आँसू की रोमांचक मुक्त प्रवाह से, दिमाग को साफ करने के लिए बनाता है।

2. Pyrethrum उनके नर्वस सिस्टम में खलल न डालें से कीट को मारता है। Pyrethrins "सोडियम चैनल" सोडियम आयनों एक तंत्रिका आवेग संचारित करने की प्रक्रिया के हिस्से के रूप में एक सेल में प्रवेश करने की अनुमति देता है कि सेलुलर संरचना को विषाक्त कर रहे हैं।

3. Pyrethrum जड़ आदि सिर दर्द, चेहरे की नसों के दर्द और गठिया का प्यार, दांत दर्द, में एक sialagogue के रूप में लगभग विशेष रूप से इस्तेमाल किया है, या अलिजिह्वा की जीभ या गले, या विश्राम के epalsy में एक स्थानीय उत्तेजक के रूप में।

4. Pyrethrum anacycline, isobutylamide, inulin और आवश्यक तेल के निशान होते हैं। इंसुलिन निर्भर मधुमेह के रोगियों में दवा का उपयोग इंसुलिन की खुराक कम कर देता है। यह 3-6 सप्ताह के लिए मौखिक प्रशासन के बाद प्लाज्मा ग्लूकोज और सीरम कोलेस्ट्रॉल के स्तर को कम किया है।

5. ues जूँ और उनके अंडे और मच्छर कुंडली में मारने के लिए। [10], [11], [12

2.7.5 आयुर्वेदिक गुण

1. गुना (गुण) - Ruksha (सूखा), Tikshan (तीव्र)

2. Virya (शक्ति) - Ushan (हॉट), रासा (स्वाद) - Katu (तीखे), Prabhav (प्रभाव) - Shukrashodhan

कर्मा:। Vatahara, Pittahara, Kaphahara, saukrala, Vajikara, Svedakara, Dipana, Buddhivardhaka, Balakrka [7]

3. सामग्री और विधि:-

एक परीक्षण संयंत्र: पत्ते / जड़ / पूरे संयंत्र पाउडर

2 सॉल्वैंट्स: इथेनॉल और मेथनॉल (500 मिलीलीटर प्रत्येक)

3 कांच के बने पदार्थ: शंक्वाकार बोतल - 50ml / 8nos, बीकर (8nos।), पेट्री डिश / कवर, ग्लास रॉड

4 सिलेंडरों को मापने

5 कपास

6 Whattman फिल्टर पेपर नंबर 1

7 मुलर हिंटन अगर / पोषक तत्व अगर / पोषक तत्व शोरबा मध्यम

8 टेस्ट जीवों: Staphyllococcus ऑरियस, ई.कोलाई, Pseudomonas aeruginosa, साल्मोनेला Abony, बदलनेवाला vulgeris।

 Table No. 1: List of Chemicals

Sr. No.	Chemicals	Manufacture
1.	Readymade Agar Media	Hi-Media
2.	Beef extract	Hi-Media
3.	Peptones	Hi-Media
4.	Ethanol	Rankem
5.	Methanol	Rankem
6.	Sodium Chloride	Merk

3.1.2. List of instruments

              Table No.2: List of Instrument

Sr. No.	Instruments	Manufacturer
1.	Laminar Air Flow	Veekay Blower Industries, India.
2.	Autoclave	D4 Surgicals India
3.	GC/MS	SHIMADZU Japan
4.	BOD Incubator	Vertical Industries, India
5.	pH meter	Orion 4 star
6.	Analytical balance	Sartorius BP 210
7.	Microbial Spreader	-
8.	Cork Borer	-

3.2. LIST OF TEST MICROORGANISM

             Table No.3: Test Microorganism       

Sr.No.	Microorganisms	ATCC NO.
1.	Staphyllococcus aureus	6538
2.	Escherichia coli	10346
3.	Pseudomonas aeruginosa	9027
4.	Salmonella abony	6014
5.	Proteus vulgeris	6380

(सभी  18hrs पुराने थे।)

रोगाणुरोधी विश्लेषण के लिए इस्तेमाल सभी जीवाणु संस्कृति का था। बैक्टीरिया 37 डिग्री सेल्सियस पर पोषक तत्व शोरबा (नो बॉल) पर बनाए रखा गया

3.5 Inoculum के तैयारी:- 

ग्राम सकारात्मक S.aureus और ग्राम नकारात्मक कोलाई, बदलनेवाला और Psedomonas थे पोषक तत्व शोरबा में उपसंस्कृति और 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर ओवन में रात भर रखा उपसंस्कृति 7-10 दिनों के लिए पुरानी संस्कृति इस्तेमाल किया गया। उपसंस्कृति सूक्ष्मजीवों रोगाणुरोधी अध्ययन में इस्तेमाल कर रहे हैं।

3.6 संयंत्र सामग्री व निकासी की तैयारी

Anacyclus गुलदाउदी के पूरे संयंत्र प्रभु के हर्बल और औषधीय संयंत्र केंद्र, महाराष्ट्र और authticated से एकत्र किया गया था। पूरी तरह से सूख भागों आसुत जल से धोया और टुकड़ों में काट।

सूखे जड़ों मेथनॉल और इथेनॉल प्रत्येक का पिघला हुआ और मूसल पाउडर के 10 ग्राम के लिए जोड़ा गया था लायक 100 मिलीलीटर में कुचल दिया गया था। कुप्पी कपास प्लग के साथ बंद कर दिया और कमरे के तापमान (30 डिग्री। सेल्सियस) 24 घंटे के लिए पर incubated था। निकालें वाटमान फिल्टर पेपर नंबर 1 का उपयोग कर फ़िल्टर किया गया था। क्रमशः TS1, TS2 के रूप में निकालने लेबल। पौधों की हवाई भाग के सूखे पाउडर भी मेथनॉल और इथेनॉल प्रत्येक के 100 मिलीलीटर के साथ मिश्रण किया गया था। मिश्रण निकालने वाटमान फिल्टर पेपर नंबर 1 का उपयोग कर फ़िल्टर और क्रमशः TS3, TS4 के रूप में निकालने लेबल था .अब (30 डिग्री। सेल्सियस) कमरे के तापमान पर 24 घंटे के लिए incubated था।

3.7 रोगाणुरोधी परख

आगर अच्छी तरह से प्रसार परख विधि निषेध के क्षेत्र का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। पोषक तत्व अगर की 25 मिलीलीटर पेट्री डिश में जोड़ा गया है, पोषक तत्व अगर 10-15 मिनट के लिए व्यवस्थित करने के लिए अनुमति दी गई थी। अब काग बोरर (10mm) के साथ अगर पंच। थाली पर परीक्षण सूक्ष्मजीव की 0.1ml जोड़ें और एक बाँझ स्प्रेडर के साथ फैल गया। अब कुओं में अर्क (0.1ml) लोड .Allow 37C पर 24hrs के लिए ऊष्मायन के लिए प्लेटें।

चार नमूने परीक्षण जीवाणुरोधी परख के लिए इस्तेमाल किया गया। अगर अच्छी तरह से प्रसार विधि द्वारा निर्धारित जीवाणुरोधी गतिविधि। आगर कप bioassay संयंत्र निकालने के रोगाणुरोधी गतिविधि के परीक्षण के लिए नियुक्त किया गया था। रेडीमेड अगर मध्यम (हाय-मीडिया, 39g) आसुत जल में निलंबित कर दिया और 20 मिनट के लिए 15 पौंड / inc2 के दबाव में autoclaved किया गया था। टेस्ट जीवों पोषक तत्व शोरबा में टीका और 18-24 घंटे इस्तेमाल कर रहे हैं के लिए 37ᵒc पर incubated हैं। 10μl परीक्षण जीव समान रूप से बाँझ स्प्रेडर की मदद से अगर प्लेट टीका लगाना और तरल संस्कृति अगर में सोख करने की अनुमति टीका के बाद 5-6 मिनट के लिए प्रतीक्षा करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। फिर चार कुओं बाँझ काग बोरर के इस्तेमाल से अगर प्लेट की सतह पर बना है और सेट -1 यानी TS1, TS3, -ve (मेथनॉल) और एंटीबायोटिक या सेट -2 यानी TS2, TS4, नकारात्मक नियंत्रण (इथेनॉल के रूप में नामित किया गया ) और एंटीबायोटिक। अब बाँझ micropipette की मदद से methanolic या ethanolic निकालने के 10 μl कुओं में जोड़ा गया है। शेष कुओं नकारात्मक नियंत्रण (मेथनॉल या इथेनॉल) और मानक एंटीबायोटिक के 10 μl की μl with10 भर गया। तरल निकालने अगर में सोख करने के लिए अनुमति देने के लिए टीका के बाद 5-6 मिनट के लिए प्रतीक्षा करें। प्लेटें कि 24-48 घंटे के लिए 37ᵒC पर incubated रहे हैं और बाद निषेध के क्षेत्र मापा गया। पांच प्रतिकृति प्रत्येक उपचार के लिए बनाए रखा गया है और औसत पर्वतमाला के परिणाम अनुभाग में दर्ज़ है।

चित्रा 3: ई.कोलाई, 1-TS2, 2-टीएस -4 के निषेध के क्षेत्र, 3 -ETHANOL 4 - एंटीबायोटिक

चित्रा 4: स्यूडोमोनास के निषेध का क्षेत्र, 1- TS2, 2- टीएस -4, 3- इथेनॉल 4 एंटीबायोटिक।

चित्रा 5: ई.कोलाई के निषेध का क्षेत्र, 1- TS2, 2- टीएस -4, 3- इथेनॉल 4 एंटीबायोटिक

3.8 न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता (एमआईसी): -

न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता रात ऊष्मायन के बाद सूक्ष्मजीव के दिखाई देने वाले विकास को बाधित करेगा कि एक रोगाणुरोधी की सबसे कम एकाग्रता के रूप में परिभाषित किया गया है। न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता मुख्य रूप से प्रतिरोध की पुष्टि करने के लिए नैदानिक ​​प्रयोगशालाओं द्वारा इस्तेमाल किया जाता है, लेकिन सबसे अधिक बार अनुसंधान उपकरण के रूप में न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता ब्रेकप्वाइंट निर्धारित करने के लिए। एमआईसी परीक्षण मैं) शोरबा कमजोर पड़ने विधि और ii) आगर कमजोर पड़ने विधि के दो विधि कर रहे हैं।

यहाँ शोरबा कमजोर पड़ने विधि TS1, TS2, TS3, TS4 की एमआईसी निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। बाँझ एमआईसी 5ml, 2ml और 0.5ml, छोटे छाया हुआ टेस्ट ट्यूब और रात भर शोरबा संस्कृतियों के pipettes स्नातक की उपाधि के लिए आवश्यक हैं। कोलाई होने में गंदगी का रातोंरात बड़े शोरबा संस्कृति बराबर 0.5 मैकफ़ारलैंड के 0.5 मिलीलीटर के अलावा द्वारा हौसले से तैयार शोरबा जोड़ा पालन के प्रत्येक ट्यूब 4ml को ए, बी, सी, डी, ई, एफ के रूप में लिया और लेबल छह बाँझ caped टेस्ट ट्यूब। Anacyclus गुलदाउदी के विभिन्न एकाग्रता 10,000 μl / एमएल की दी ताकत के साथ धारावाहिक कमजोर पड़ने विधि द्वारा तैयार किया गया था। हौसले शोरबा तैयार की प्रत्येक ट्यूब 1,2,3,4,5 के रूप में लिया और लेबल पांच बाँझ टेस्ट ट्यूब 4.5ml जोड़ें। अब इस 500μl / एमएल की एकाग्रता देना होगा टेस्ट ट्यूब नंबर 1 के लिए Anacyclus गुलदाउदी के शेयर समाधान की 0.5ml हस्तांतरण। इसी प्रकार विभिन्न एकाग्रता निम्नलिखित द्वारा 50 μl / एमएल, 5 μl / एमएल, 0.5 μl / एमएल, 0.05 μl / एमएल तैयार कर रहे हैं

(50μl / एमएल) - ट्यूब No.2 परीक्षण करने के लिए टेस्ट ट्यूब नंबर 1 के 0.5 मिलीलीटर जोड़ें।

(5μl / एमएल) - ट्यूब .3 परीक्षण करने के लिए टेस्ट ट्यूब No.2 की 0.5ml जोड़ें।

कोई टेस्ट ट्यूब के 0.5 मिलीलीटर जोड़ें। (0.5μl / एमएल) - टेस्ट ट्यूब संख्या 4 के लिए 3।

परीक्षण tube1, 2, 3 से Anacyclus गुलदाउदी के विभिन्न एकाग्रता की 0.5ml, क्रमशः 4 और हौसले से तैयार शोरबा की ट्यूब एफ 0.5ml को ए, बी, सी, डी ट्यूब करने के लिए जोड़ा एक नियंत्रण के रूप में जोड़ा। 24 घंटे के लिए टेस्ट ट्यूब सेते हैं और परिणाम दस्तावेज हैं।

3.9 न्यूनतम जीवाणुनाशक एकाग्रता

न्यूनतम जीवाणुनाशक एकाग्रता अलग हौसले से तैयार अगर प्लेट में डाल दिया और रात भर incubated हैं टेस्ट ट्यूब 1,2,3,4 की एंटीबायोटिक मुक्त media.0.5 मिलीलीटर पर उपसंस्कृति के बाद एक जीव के विकास को रोकने के लिए होगा कि रोगाणुरोधी की सबसे कम एकाग्रता है। ऊष्मायन के बाद जीवों की कोई विकास नहीं दिखा प्लेट अति पिछड़े वर्गों के रूप में दर्ज हैं।

3.10 गैस क्रोमैटोग्राफी-जन स्पेक्ट्रोस्कोपी (जीसी एमएस) के विश्लेषण: -

गैस chromatograph और मास स्पेक्ट्रोमीटर: जीसी एमएस दो प्रमुख इमारत ब्लॉकों से बना है। गैस chromatograph स्तंभ के आयामों के साथ ही चरण गुणों पर निर्भर करता है जो एक केशिका स्तंभ का इस्तेमाल करता है। नमूना स्तंभ की लंबाई यात्रा के रूप में एक मिश्रण में अलग अणुओं के बीच रासायनिक गुणों में अंतर अणुओं अलग कर देगा। अणुओं स्तंभ द्वारा बनाए रखा जाता है और फिर elute (अवधारण समय कहा जाता है) अलग अलग समय पर स्तंभ से (के बंद आते हैं), और इस मास स्पेक्ट्रोमीटर नीचे की ओर, कब्जा योण में तेजी लाने, मोड़ना, और अलग से आयनित अणुओं का पता लगाने के लिए अनुमति देता है । मास स्पेक्ट्रोमीटर आयनित टुकड़ों में प्रत्येक अणु को तोड़ने और अनुपात चार्ज करने के लिए उनके द्रव्यमान का उपयोग कर इन टुकड़ों का पता लगाने के द्वारा इस करता है। एक साथ इस्तेमाल इन दोनों घटकों, अलग से इस्तेमाल किया या तो यूनिट की तुलना में पदार्थ की पहचान की एक बहुत महीन डिग्री अनुमति देते हैं। यह गैस क्रोमैटोग्राफी या अकेले मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा एक विशेष अणु का एक सटीक पहचान बनाने के लिए संभव नहीं है। मास स्पेक्ट्रोमेट्री प्रक्रिया सामान्य रूप से एक पारंपरिक डिटेक्टर (जैसे लौ ionization डिटेक्टर) स्तंभ के माध्यम से यात्रा करने के लिए समय की एक ही राशि लेने के लिए होता है कि कई अणुओं के बीच अंतर नहीं कर सकते हैं का उपयोग कर गैस क्रोमैटोग्राफी, जबकि एक बहुत शुद्ध नमूने की आवश्यकता है (यानी एक ही अवधारण समय है) दो या दो से अधिक अणुओं में जो परिणाम सह-Elute करने के लिए। कभी-कभी दो अलग अलग अणुओं भी एक मास स्पेक्ट्रोमीटर में आयनित टुकड़े के एक समान पैटर्न (जन स्पेक्ट्रम) हो सकता है। यह दो अलग अलग अणुओं एक गैस chromatograph और एक मास स्पेक्ट्रोमीटर दोनों में एक ही तरह से व्यवहार करेंगे कि बहुत संभावना नहीं है के रूप में दो प्रक्रियाओं के संयोजन, त्रुटि की संभावना कम कर देता है। एक की पहचान जन स्पेक्ट्रम एक जीसी एमएस विश्लेषण में एक विशेषता अवधारण समय पर प्रकट होता है, इसलिए, जब यह आम तौर पर ब्याज की विश्लेष्य नमूने में निश्चित है कि बढ़ी हुई को उधार देता है।

नमूनों की जीसी एमएस विश्लेषण एक पार से जुड़े मिथाइल सिलिकॉन गम चरण केशिका स्तंभ (25 मीटर x 0.32mm) के साथ सुसज्जित मास संवेदनशील डिटेक्टर, का उपयोग किया जाता था। हाइड्रोजन वाहक गैस के रूप में इस्तेमाल किया गया था और तापमान प्रोग्रामिंग 40 डिग्री सेल्सियस पर प्रारंभिक ओवन के तापमान के साथ सेट और 2 मिनट के लिए आयोजित की और ओवन के अंतिम तापमान 10 डिग्री सेल्सियस / मिनट की दर से 280 डिग्री सेल्सियस था। एक 2 μL नमूना splitless मोड के साथ इंजेक्ट किया गया था। जन स्पेक्ट्रा इलेक्ट्रॉन प्रभाव आयनीकरण ऊर्जा 70 eV के साथ 35-650 एएमयू सीमा से अधिक दर्ज किया गया। एक नमूना के लिए कुल समय चल रहा है 45 मिनट है।

4. परिणाम और चर्चा

संयंत्र सामग्री व निकासी की 4.1 तैयारी

चार नमूने निकासी और क्रमश: टीएस 1 TS2 TS3 TS4 के रूप में चिह्नित हुई निकालने के लिए विषय थे। TS1 और TS3 methanolic निकालने हैं और TS2 और TS4 एपी के ethanolic निकालने हैं। TS1 और TS2 TS3 और TS4 हवाई हैं जहां के रूप में एपी की जड़ हिस्सा हैं। इन निष्कर्षों उनकी तैयारी के बाद तुरंत अपने जीवाणुरोधी प्रभाव के लिए विश्लेषण किया गया।

4.2 रोगाणुरोधी परख

Anacyclus गुलदाउदी के विभिन्न निकालने के प्रभाव पाँच अलग अलग सूक्ष्मजीवों के खिलाफ जांच कर रहे थे। सभी निकालने संवेदनशीलता की डिग्री बदलती के साथ सूक्ष्मजीव हिचकते। वर्तमान अध्ययन में प्राप्त परिणाम से राहत मिली एस ऑरियस, ई.कोलाई, Pseudomonas aeruginosa, बदलनेवाला vulgeris के खिलाफ जांच की औषधीय संयंत्र निकालने posses संभावित जीवाणुरोधी गतिविधि। Methanolic और Anacyclus गुलदाउदी की ethanolic निकालने का उपयोग करके अच्छी तरह से प्रसार विधि द्वारा जब जांच की।

सारणी 4: Anacyclus Pyrethrum की मेथनॉल निकालने के रोगाणुरोधी गतिविधि

Micro-organism	Test Solution 1	Test Solution 3	Methanol ( -ve )	Antibiotic
S. Aureus	12 mm	10 mm	8 mm	28 mm
E. Coli	18 mm	10 mm	8 mm	30 mm
Pseudomonas	16 mm	14 mm	10 mm	28 mm
S.Abony	14mm	12mm	8mm	28mm
Proteus	18 mm	12 mm	8 mm	30 mm

रूट (TS1) की methanolic निकालने एस ऑरियस में दर्ज की गई सबसे जीवाणुरोधी और कम से कम गतिविधि 12 मिमी मापा, 18 मिमी के आसपास, ई.कोलाई और बदलनेवाला के खिलाफ महत्वपूर्ण गतिविधि दिखाया। स्यूडोमोनास 14 मिमी के लिए है और ई.कोलाई और एस में सबसे कम TS3 की TS1.the उच्चतम गतिविधि के लिए की तुलना के रूप में Anacyclus गुलदाउदी की हवाई भाग के methanolic निकालने (TS3) कम गतिविधि दिखा रहे हैं। Aures 10mm। TS2 की तुलना में जीवाणुरोधी गतिविधि TS1 के लिए अधिक था। निषेध क्षेत्रों के व्यास अलग सूक्ष्मजीव प्रजातियों के बीच 18 मिमी 10 मिमी से लेकर और परीक्षण समाधान की एकाग्रता में वृद्धि के साथ वृद्धि हुई है। निषेध की अधिकतम क्षेत्र TS3 के लिए 10mm के लिए करने के लिए मिला TS1 और निषेध के न्यूनतम क्षेत्र के साथ कोलाई, बदलनेवाला के लिए मिला था।

चित्रा 7: रोगाणुओं पर एपी की मेथनॉल निकालने का प्रभाव

तालिका 5: Anacyclus Pyrethrum की इथेनॉल निकालने के रोगाणुरोधी गतिविधि

Micro-organism	Test Solution 2	Test Solution 4	Ethanol ( -ve )	Antibiotic
S. Aureus	16  mm	15 mm	8  mm	28 mm
E. Coli	26  mm	18 mm	8  mm	29 mm
Pseudomonas	24 mm	20 mm	8  mm	28 mm
S.Abony	14 mm	12 mm	8 mm	28 mm
Proteus	23 mm	22 mm	8 mm	30 mm

रूट (TS2) और हवाई हिस्सा (TS4) की ethanolic निकालने एस ऑरियस, ई.कोलाई स्यूडोमोनास aeruginoisa, एस Abony और बदलनेवाला के खिलाफ महत्वपूर्ण गतिविधि दिखाया। 26mm के आसपास जड़ TS2 शो की ethanolic निकालने, एस Abony में दर्ज स्यूडोमोनास और बदलनेवाला और कम से कम गतिविधि के लिए क्रमश: 24mm और 23mm के साथ उच्चतम जीवाणुरोधी 14 मिमी मापा। बदलनेवाला 22 मिमी के लिए है और एस में सबसे कम 12 मिमी Abony TS4 की TS2.The उच्चतम गतिविधि के लिए की तुलना के रूप में Anacyclus गुलदाउदी की हवाई भाग के ethanolic निकालने (TS4) कम गतिविधि दिखा रहे हैं। TS4 की तुलना में जीवाणुरोधी गतिविधि TS2 के लिए अधिक था। निषेध क्षेत्रों का व्यास 12 मिमी से अलग सूक्ष्मजीव प्रजातियों के बीच 26 मिमी तक बताया गया। निषेध की अधिकतम क्षेत्र TS2 और TS4 के लिए 12 मिमी के लिए करने के लिए मिला निषेध की न्यूनतम क्षेत्र के साथ, ई.कोलाई के लिए मिला था।

8 चित्रा: रोगाणुओं पर एपी की इथेनॉल निकालने का प्रभाव

जड़ की methanolic निकालने और एपी के हवाई भाग की तुलना करने के रूप में जड़ और हवाई हिस्सा posses अधिक जीवाणुरोधी शक्ति का कुल मिलाकर ethanolic निकालने। हवाई हिस्सा निकालने के लिए की तुलना के रूप में methanolic और ehthanolic निकालने के अलावा, जड़ अर्क अधिक जीवाणुरोधी शक्ति से पता चलता है। जड़ और हवाई हिस्सा posses अधिक शक्ति के इथेनॉल निकालने जड़ और हवाई भाग के methnolic निकालने के लिए की तुलना के रूप में। इसलिए रूट (TS3) की alls ethanolic निकालने बीच कोलाई के खिलाफ अधिकतम शक्ति के साथ अच्छा रोगाणुरोधी गतिविधि से पता चलता है। न्यूनतम गतिविधि एस ऑरियस और कोलाई के खिलाफ anacyclus गुलदाउदी की हवाई भाग के methanolic निकालने के लिए मनाया गया। इन आंकड़ों से यह methanolic निष्कर्षों की तुलना करना ethanolic अर्क अधिक शक्तिशाली antimicrobials हैं कि स्पष्ट है। यह भी एपी के हवाई भाग की तुलना करने के रूप में एपी की जड़ हिस्सा posses अधिक रोगाणुरोधी शक्ति है कि संकेत मिलता है। अधिकतम रोगाणुरोधी गतिविधि कोलाई के खिलाफ TS3 द्वारा posses है के रूप में यह आगे की जांच के लिए विचार है।

4.3 न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता (एमआईसी)

परीक्षण tube1, 2, 3 से Anacyclus गुलदाउदी के विभिन्न एकाग्रता की 0.5ml, क्रमशः 4 और हौसले से तैयार शोरबा की ट्यूब एफ 0.5ml को ए, बी, सी, डी ट्यूब करने के लिए जोड़ा एक नियंत्रण के रूप में जोड़ा। 24 घंटे और परिणामों के लिए टेस्ट ट्यूब सेते हैं और स्पष्ट समाधान दिखा न्यूनतम एकाग्रता मनाया और 500μl / एमएल टेस्ट ट्यूब के रातोंरात बड़े संस्कृति न्यूनतम जीवाणुनाशक एकाग्रता के लिए उपयोग किया जाता है कि एमआईसी के रूप में दर्ज कर रहे हैं के दस्तावेज।

टेबल 6: ई कोलाई के खिलाफ TS2 की न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता

Microorganism	Minimum inhibitory Concentration of TS2
E.coli	500µl/ml

4.4 न्यूनतम जीवाणुनाशक एकाग्रता

न्यूनतम जीवाणुनाशक एकाग्रता अलग हौसले से तैयार अगर प्लेट में डाल दिया और रात भर incubated हैं टेस्ट ट्यूब 1,2,3,4 की एंटीबायोटिक मुक्त media.0.5 मिलीलीटर पर उपसंस्कृति के बाद एक जीव के विकास को रोकने के लिए होगा कि रोगाणुरोधी की सबसे कम एकाग्रता है। ऊष्मायन के बाद जीवों की कोई विकास नहीं दिखा न्यूनतम एकाग्रता युक्त थाली अति पिछड़े वर्गों के रूप में दर्ज हैं।

टेबल 7: कोलाई के खिलाफ TS2 की न्यूनतम जीवाणुनाशक एकाग्रता

Microorganism	Minimum Bactericidal concentration of TS2
E.coli	50µl/ml

4.5 पतली परत क्रोमैटोग्राफी (टीएलसी)

क्रोमैटोग्राफी तकनीक घटक के मिश्रण को अलग करने के लिए प्रयोग किया जाता है। पतली परत क्रोमैटोग्राफी adsorbent सामग्री सिलिका जेल की एक पतली परत के साथ लेपित किया गया था, जो कांच एल्यूमीनियम पन्नी, के एक पत्रक पर प्रदर्शन किया गया था। पी लेनेवाला की यह परत स्थिर चरण के रूप में जाना जाता है। नमूना केशिका ट्यूब, टोल्यूनि की एक विलायक मिश्रण की मदद से थाली पर लागू किया गया है के बाद: एथिल एसीटेट (85:15) केशिका क्रिया के माध्यम से थाली तैयार की है। अलग analytes अलग दरों पर टीएलसी थाली चढ़ना क्योंकि, जुदाई हासिल की है। यह अलग analytes कटौती और इथेनॉल में भंग करने और जीसी एमएस विश्लेषण के लिए उपयोग कर रहे हैं।

4.6 जीसी एमएस विश्लेषण

ए गुलदाउदी की पेशाब की गैस क्रोमैटोग्राफी मास स्पेक्ट्रोमेट्री (जीसी एमएस) विश्लेषण निकालने पेशाब की .GC एमएस चिह्नित करने के लिए आदेश में संकेत बाहर किए गए, जिनमें से यौगिकों के साथ मिलान विखंडन के साथ एक परिसर की उपस्थिति नीचे आयोजिक थे बनाए रखा विश्लेषणात्मक शर्तों का पालन के रूप में थे

Analytical conditions maintained were as follow

temperatures:	250°C (column) 250°C (injector) 300°C (detector)
column gas flow:	1.2 mL/min (hydrogen)
make-up gas flow:	60 mL/min (nitrogen)
injection size:	1.0 µL
injection split:	55 to 1
column:	SPB-l, 1.0-µm film thickness, 30 m × 0.32-mm i.d. fused silica (Supelco Inc.)
retention times: (min)	2.38 (p-chlorobiphenyl) 16 (cinerin I) 7.31 (jasmolin I) 12.83 (cinerin II) चित्रा 10: जीसी / एमएस विश्लेषण